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Cistos de Besnoitia foram encontrados nos músculos e vísceras de quinze exemplares de Didelphis marsupialis de um total de duzentos e vinte e quatro examinados. É a primeira vez que este protozoário e isolado de animais infectados naturalmente no Brasil. A transmissão experimental foi feita para animais de laboratório pela inoculação de triturados de tecidos e cistos.<br>From a total of 224 Didelphis marsupialis examined, in 15 were found cysts of Besnoitia in muscles and viscera. It's the first time that this protozoan is isolated from naturally infected animals in Brazil. The experimental transmission to laboratory animals was done by the inoculum of tissue and cysts triturated.