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Introdução: é crescente a preocupação sobre o efeito mutagênico e carcinogênico de agentes genotóxicos em populações expostas ocupacionalmente. Entre os diferentes agentes de risco ocupacional, destacam-se as drogas antineoplásicas. Objetivo: este trabalho avaliou o risco ocupacional dos profissionais que manipulam quimioterápicos em hospitais e clínicas de Caxias do Sul (RS), Brasil. Metodologia: vinte farmacêuticos e enfermeiros que manipulam quimioterápicos foram monitorados durante uma semana de trabalho, tendo sido coletadas seis amostras de sangue: segunda-feira pela manhã (antes de iniciar o trabalho) e à tarde, e terça a sexta-feira à tarde. Foi avaliada a genotoxicidade, através do ensaio cometa que identifica dano ao DNA; e, por ser simples, rápido e de baixo custo, tem sido recomendado para avaliação rotineira de trabalhadores em risco com agentes genotóxicos. Resultados: neste trabalho, os indivíduos expostos apresentaram um aumento no dano ao DNA pelo teste cometa em relação aos controles em todas as amostras, exceto na segunda-feira de manhã (p=0,000 e p=0,143, respectivamente), mostrando assim a importância do descanso do final de semana. Os resultados do ensaio cometa também mostraram uma correlação positiva com os dias da semana e com o consumo de álcool (r=0,228, p=0,014). Conclusão: o monitoramento de profissionais em risco ocupacional de forma mais prolongada, como neste estudo, durante uma semana, é extremamente relevante, pois pode apresentar novos aspectos do comportamento de risco, cujos resultados podem complementar o controle do risco de genotoxicidade.