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Este trabalho discute uma experiência de abordagem das questões de gênero e sexualidade em um curso de formação de professores de Ciências e Biologia vinculado ao Plano Nacional de Formação de Professores da Educação Básica (PARFOR). As ações pedagógicas foram desenvolvidas em três componentes curriculares nomeados de Seminários Temáticos, totalizando 45 horas e a proposta foi pautada em uma perspectiva desestabilizadora e não prescritiva com a utilização de estratégias didáticas diversificadas. Os professores-cursistas (trinta e sete, ao todo) compreenderam a influência dos olhares socioculturais sobre a produção dos gêneros e das sexualidades e reconheceram a existência de processos discriminatórios nos espaços educativos como a homofobia, contudo, se sentem receosos de debatê-los e sofrerem represálias por parte de familiares ou da gestão escolar. Palavras-chave Formação em serviço, gênero, sexualidade e diferenças.