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The object of this work was to extract the genomic DNA of solid tissue from Nile tilapia (Oreochromis niloticus), pacu (Piaractus mesopotamicus), piau (Leporinus sp.) and curimba (Prochilodus lineatus), using the methods Proteinase K (PK) and Cetyltrimethylammiun Bromide (CTAB). The DNA extractedfrom samples of liver, kidney, tail fin, heart, muscle and gills were quantified in spectrophotometer to determine the concentration and purity through the ratio A260nm/A280nm. The data were statistically analyzed and there were no significant effect of interaction between species and tissues about the purityand concentration of the DNA obtained with CTAB, but for the PK there were interaction about the concentration. Using the CTAB method was verified that the mean quantity of DNA in the curimbakidney was significantly (p<0.05) lower (106.98 μg/mL) than the value observed in pacu, whereas, did not differ from the variables found in piau (497.20 μg/mL) and tilapia (234.50 μg/mL). For the PK method, the mean quantity of DNA using the muscle of Nile tilapia presented the lowest value (117.35 μg/mL) with preference to the other tissues and analyzed species (P<0.05). The ratio A260nm/A280nm changed from 1.7 to 2.0 and 1.6 to 2.1 for the PK and CTAB methods, respectively. It may be concluded that the DNA purity was satisfactory for the different tissues on the four species of fish.<p><p>O objetivo desse trabalho foi extrair o DNA genômico de tecidos sólidos de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus), pacu (Piaractus mesopotamicus), piau (Leporinus sp.) e curimba (Prochilodus lineatus), utilizando os métodos Proteinase K (PK) e Brometo de Cetiltrimetilamônio (CTAB). O DNA extraído das amostras de fígado, rim, nadadeira caudal, coração, músculo e brânquias foi quantificado em espectrofotômetro para determinação da concentração e da pureza por meio da razão A260nm/A280nm. Os dados foram estatisticamente analisados e não se observou efeito significativo para a interação entre espécies e tecidos em relação à pureza e concentração do DNA obtido a partir do CTAB, porém para PK houve interação em relação à concentração. Utilizando o método CTAB verificou-se que a concentração média de DNA no rim de curimba foi significativamente (p < 0,05) inferior (106,98 ?g/mL) à observada em pacu (1727,90 ?g/mL), porém não diferiram das encontradas em piau (497,20 ?g/mL) e tilápia (234,50 ?g/ mL). Para o método PK, a concentração média de DNA utilizando o músculo de tilápia do Nilo apresentou o menor valor (117,35 ?g/mL) em relação aos demais tecidos e espécies analisadas (p < 0,05). A razão A260nm/A280nm variou de 1,7 a 2,0 e 1,6 a 2,1 para os métodos PK e CTAB, respectivamente. Conclui-se que a pureza do DNA foi alcançada nos diferentes tecidos estudados, demonstrando que o método PK pode ser utilizado para essas quatro espécies de peixes.