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El presente trabajo explora la estrategia de adquisición de conocimiento de las spin-off universitarias, en el marco de la discusión teórica sobre la concurrencia de distintas fuentes de conocimiento en la estrategia tecnológica e innovadora de las empresas. La base empírica de esta investigación la constituye una encuesta a la población de empresas creadas en el sistema universitario andaluz. La investigación permite observar que, en sus procesos de innovación, las empresas estudiadas combinan el conocimiento que se deriva de la realización de I+D interna con el adquirido a través de su relación con agentes externos. En la literatura sobre innovación, existe cierta carencia de estudios empíricos que usen como unidad de análisis a las empresas spin-off. Por ello, los resultados de este trabajo ofrecen interés para este campo científico y también importantes implicaciones en el ámbito de las políticas públicas de innovación.