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The objectives of this work were to evaluate the frequency of polyembryony, and to identify zygotic and nucellar seedlings of Citrus volkameriana using RAPD. Twenty-five polyembryonic and eight monoembryonic seeds were cultivated in vitrofor six months. DNA from seedlings was extracted and used in combination with five RAPD primers to identify zygotic or nucellar origin of the seedlings. Environmental conditions of the year affected significantly (P<0.05) the morphological characteristics of fruitsand the number ofembryos per seed. Polyembryonic seeds ranged from 30.9%, 44.8% to 54.4% over three years. Morphological characteristic was not correlated with polyembryony. In vitro culture enable all embryos of each seed to grow, favoring the percentage of seedlings identified as zygotic. In polyembryonic and monoembryonic seeds, 25.9% and 87.5% of the seedlings, respectively, were sexually originated. In polyembryonic seeds, not all zygotic seedlings were produced by small embryos located at the micropyle.<br>Os objetivos deste trabalho foram avaliar a freqüência da poliembrionia e indentificar os seedlings zigóticos e nucelares de Citrus volkameriana usando RAPD. Cultivaram-se in vitro 25 sementes poliembriônicas e 8 monoembriônicas, por seis meses. Extraiu-se o DNA dos seedlings e usou-se em combinação com cinco primers RAPD para identificar a origem zigótica e nucelar das plântulas. Os resultados mostraram que as condições ambientais do ano afetaram significativamente (P<0,05) as características morfológicas dos frutos e o número de embriões por semente. Os índices de sementes poliembriônicas variaram nos três anos de avaliação (30,9%, 44,8% e 54,4%). As características morfológicas não se correlacionaram com a poliembrionia. A cultura in vitro possibilita que todos os embriões de cada semente cresçam, favorecendo os seedlings identificados como zigóticos. Nas sementes poliembriônicas e monoembriônicas, 25,9% e 87,5% dos seedlings, respectivamente, originaram-se sexualmente. Nem todos os seedlings zigóticos foram produzidos por embriões localizados no micrófilo das sementes poliembriônicas.