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Os isótopos ambientais são os principais traçadores naturais do ciclo hidrológico. Os isótopos estáveis dos elementos presente na molécula de água, 2H, 18O são estudados a partir da sua variação no sistema em comparação com um padrão. Este trabalho apresenta os resultados dos estudos hidrogeológicos utilizando os isótopos ambientais estáveis 2H e 18º realizados no alto da bacia do rio Jequitibá, na região de Sete Lagoas, estado de Minas Gerais. À partir das análises do conteúdo de 2H e 18O, foi possível determinar a origem das águas como sendo próximas da isotopia das águas pluviais, superficiais ou subterrâneas. Estes resultados podem contribuir na caracterização das águas subterrâneas da área e servir de subsídio para a gestão dos recursos hídricos.